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    使用Invitrogen轉染試劑需要注意什么?

    發布時間:2022-09-13      點擊次數:92
       Invitrogen轉染試劑在細胞轉染、細胞識別、抗體蛋白研發等領域廣泛使用,通??梢灾苯淤徺I或者過實驗室中DIY配制。Lipofectamine、fugene、磷酸鈣、是較為常見的轉染試劑,其實目前市場上的轉染試劑盒針對某些轉染進行了優化,使用起來較為方便。
      
      由于省掉了電轉杯,轉染過程也更為簡化:只需將細胞和核酸吸入Neon移液器吸頭中,再插入到移液器吸頭架上,并按“Start”即可。轉染過后,直接將細胞加入培養容器中。既沒有繁瑣的移液,也不需要清洗電轉杯。而且,通用的試劑盒適用于所有細胞類型,不用購買多個試劑盒,也無需鑒定最佳緩沖液。當然,一次性使用的24K金電極吸頭成本不低。因多次使用會導致金包被變薄,改變吸頭的電導率,所以每個吸頭最多只能使用兩次。
      
      使用Invitrogen轉染試劑需要注意什么?
      1、轉染操作時,以細胞融合度達90%-95%為佳;
      2、使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉染效率;
      3、制備轉染復合物時要求用無血清培養基稀釋DNA和轉染試劑;
      4、轉染的時候培養基中不能添加抗生素;
      5、試劑應該在4度保存,要注意避免多次反復長時間開蓋;
      6、初次使用應優化DNA濃度和陽離子脂質體試劑量以得到最大的轉染效率。DNA和轉染試劑的比例,通常推薦是1:2-1:3。
      
      轉染后需要進行終止嗎?
      不需要。脂質體復合物可以穩定存在6個小時。如果在進行轉染前沒有進行細胞換液,為了保證細胞正常生長所需的營養,需要在4~6小時后換用新的培養基。但如果轉染之前已進行過換液,則在脂質體轉染后不需要進行再次換液。
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