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    進行細胞計數時要進行哪些步驟

    發布時間:2022-09-20      點擊次數:91
      常用的計數方法主要有手工計數(如利用改良牛鮑計數板)和細胞計數儀計數(經費充裕組常備)。從原理來說,這兩種方法基本類似,大致是通過臺盼蘭或者熒光染料染色后,用肉眼或者用攝像機拍照后進行計數,差別就是前者人累,且精準度和穩定性較差;后者不累人,且精準度和穩定性較好。
      單細胞測序實驗的第一步是單細胞懸液的制備,而懸液制備中細胞計數的準確性直接影響單細胞測序的數據質量。
      1.  計數板
      用96%酒精沖洗計數板后,用干凈鹿皮擦凈,另擦凈蓋片一張;把蓋片覆在計數板上面,使之微微移向一側,露出計數板臺面少許,以便滴加細胞懸液;
      2.  染色
      取吸管1 支,伸入培養瓶中,輕輕反復吹打細胞懸液使細胞重懸均勻后,立即吸細胞懸液少許,向另一離心管中滴入細胞懸液9 滴,再滴入臺盼藍染液1 滴,混勻,置2~3 分種;
      3.  加懸液
      把計數板平放在顯微鏡臺上,立即從計數板邊緣輕輕滴1~2 滴已染色的細胞懸液,使之充滿計數板和蓋片間空隙中;
      4.  鏡檢
      鏡下觀察可見細胞分散各處,健康細胞胞體完整,透明不著色,凡著色細胞均為不健康者。計算四角大方格內的細胞數;壓中線者只計算左線和上線者,右線和下線不計算在內(即僅計算壓兩個邊的細胞)。
      5.  接種培養
      通過計數測知懸液中細胞數后,可根據實驗所需細胞數量向培養容器中接種。細胞接種數量隨實驗目的、血清含量和細胞生物性狀而定;一般接種量在1~10x105細胞/毫升范圍,實驗周期短,希望細胞增殖較快時,接種量可大些。用含血清量大的培養液培養胚胎來源細胞、無限細胞系和惡性細胞系時,細胞接種數量不宜太大。
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