PRECICE® ADK Assay Kit——novocib

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NOVOCIB位于法國,公司基于核苷酸代謝檢測技術,為生命科學科研用戶及食品質量檢測研究、制藥企業,提供的酶相關檢測試劑。公司擁有專門用于核苷酸代謝檢測、重組蛋白酶分析及酶檢測試劑研究的PRECICE®檢測分析平臺,實驗試劑及科研服務涉及分析領域。

人腺苷激酶的高通量測定

PRECICE ^® ADK 檢測試劑盒為 ADK 活性的體外測量和新型 ADK 抑制劑的藥物發現 提供了一種方便、高通量兼容且非放射性的檢測方法。用于藥物發現的新工具，該試劑盒允許 HTS 搜索新的 ADK 抑制劑。

原理：
腺苷激酶使用ATP作為磷酸供體。它將 ATP 的末端磷酸基團轉移到底物上，產生 ADP 作為副產物。該測定基于使用肌苷作為替代 ADK 底物和涉及高活性 IMPDH（肌苷一磷酸脫氫酶）的偶聯反應，用于直接測量由 ADK 形成的肌苷一磷酸 (IMP)。在肌苷和ATP存在下，ADK催化肌苷磷酸化形成IMP和ADP。然后在 NAD 存在下，IMP 立即被高活性 IMPDH 氧化為 XMP，從而形成 NADH ₂。

ADK在人體中的作用

腺苷激酶是一種普遍存在的酶，可調節腺苷 (AR) 的細胞內和細胞外濃度，腺苷是中樞神經系統功能的重要調節劑，也是參與缺氧、炎癥和傷害感受的信號分子。與腺苷脫氨酶一起，腺苷激酶調節細胞內和細胞外的腺苷濃度。腺苷激酶的抑制導致局部腺苷濃度的選擇性增加和體內癲癇發作易感性和傷害感受的降低⁽³⁾。ADK 功能障礙涉及多種病理，包括糖尿病⁽¹³⁾、癲癇⁽⁶⁾和癌癥。因此，ADK 成為一種合理的治療靶點，腺苷調節藥物已被廣泛應用。測試⁽¹⁾作為新的鎮痛劑和抗炎劑⁽⁴⁾治療精神分裂癥⁽⁷⁾或限制缺血性中風后的腦損傷⁽⁸⁾。

驗證

使用化合物 A-134974（一種已知的 ADK 抑制劑（Sigma-Aldrich，已獲得 Abbott Laboratories 的許可））驗證了使用PRECICE® ADK Screening Assay Kit篩選 ADK 抑制劑和 IC50 測量。Z'-Factor 由 44 個陰性（無 ADK 抑制）和陽性（用 500nM A-134974 抑制 ADK）計算得出，測量結果為 0.68，這是篩選試驗的出色性能水平

化合物 A-134974 在 12 種不同濃度下的 ADK 抑制曲線。
所有數據點代表 8 個孔的平均值 (+/-SD)（2 個孔 - 重復 - 在 4 個獨立的板上）。IC ₅₀通過用最小二乘法擬合數據的4參數非線性曲線來確定。進行 IMPDH 活性測定以確認 IMPDH 不被化合物 A-134974 抑制（數據未顯示）。

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